2.2 Диагностика гриппа: экспресс-методы

Одним из методов быстрой диагностики гриппа является такой серологический метод, как прямая реакция иммунофлюоресценции (метод флюоресцирующих антител, МФА, метод Кунса).

Оглавление:

Этот способ диагностики гриппа позволяет обнаружить антигены вируса в биологическом материале уже непосредственно через 2-3 часа после забора.

На готовые препараты исследуемых клеток наносятся специфические люминесцентные сыворотки к вирусам гриппа разных типов, в том числе и Н 1N1. Затем их исследуют в люминесцентном микроскопе. Локализация и характер свечения антигена вируса гриппа указывают не только на наличие и тип возбудителя, но и на стадию развития инфекции, а также срок ее возникновения.

Еще быстрее позволяет получить результат метод иммунохроматографического анализа (ИХА, «быстрые тесты»). Принцип этого вида диагностики гриппа, как и у других серологических методов, основан на свойстве антител связываться с антигеном гриппа избирательным образом (специфически). Результат через 10 минут.

Одним из лучших экспресс — тестов на украинском рынке является CITO TEST INFLUENZA A+B производства СerTestBiotec. S.L. Использование этого теста не требует специального оборудования и квалификации. CITO TEST INFLUENZA A+B позволяет предварительно диагностировать грипп и дифференцировать его тип в амбулаторных и домашних условиях.

Кроме того, CITO TEST INFLUENZA A+B позволяет выявить вирус в первые 48 часов от начала заболевания. Это дает возможность вовремя начать специфическое лечение и снизить риск опасных осложнений.

Делись добром 😉

Похожие главы из других работ:

1. Вирус гриппа

Вирус гриппа относится к семейству ортомиксовирусов (лат. Orthomyxoviridae) и включает три серовара А, В, С. Серовар (Серотип) — группа микроорганизмов одного вида, объединяемые общей антигенной структурой.

1.7 Осложнения гриппа

Частота возникновения осложнений заболевания относительно не велика, но в случае их развития они могут представлять значительную опасность для здоровья больного. Среднетяжёлые, тяжёлые и гипертоксические формы гриппа.

2.5 Профилактика гриппа

Традиционным способом предупреждения заболевания гриппом является вакцинация. Она осуществляется соответствующей ведущему штамму противогриппозной вакциной и содержит, как правило, антигены трех штаммов вируса гриппа.

2.1 Методы профилактики и лечения гриппа у детей

В детском возрасте риск заболеть гриппом довольно высок, так как организм еще не имеет иммунологической памяти относительно этого заболевания. Иммунитет вырабатывается только после первого контакта с патогенами.

3.3 Качественный метод экспресс анализа входного сырья

Прибор PHARMA ID представляет собой мощную портативную систему, которая позволяет осуществлять надежную верификацию сырья для фармацевтического производства. Прибор является идеальным решением для анализа растворов, гелей.

2.1 Диагностика гриппа — разные методы

В начале болезни (острый период) вирус гриппа выделяют в лаборатории из куриных эмбрионов или культуры клеток (т.н. культуральное исследование). Сроки его исполнения (до 7 дней) не позволяют подтвердить или опровергнуть диагноз моментально.

Глава 2. Диагностика сахарного диабета. Методы лабораторных исследований

сахарный диабет клинический лабораторный Диагностика сахарного диабета.

4.5.2 Экспресс-тесты для определения миокардиальных маркеров

Современная диагностика инфаркта миокарда практически невозможна без определения миокардиальных маркеров (ММ). Общепризнано.

3. Принципы проведения экспресс-анализа

3.1 Качественный экспресс-анализ

Качественный экспресс-анализ лекарственных форм отличается от макроанализа только тем, что на его выполнение расходуется меньшее количество вещества и реактива.

3.2 Количественный экспресс-анализ

Количественный экспресс-анализ может быть выполнен титриметрическими или физико-химическими методами. Титриметрический экспресс-анализ отличается от макрометодов расходом меньших количеств анализируемых лекарственных форм (0,05—0.

4. Методики экспресс-анализа

2. Диагностика и различные методы

В диагностике описываемой патологии большое значение имеет ранняя явка женщины в женскую консультацию, особенно, если беременность вторая, третья и так далее и у беременной в прошлом диагностировалась либо сенсибилизация антителами, либо.

ОСЛОЖНЕНИЯ ГРИППА

Частота возникновения осложнений заболевания относительно невелика, но в случае их развития они могут представлять значительную опасность для здоровья больного. Среднетяжёлые, тяжёлые и гипер-токсические формы гриппа.

ПРОФИЛАКТИКА ГРИППА

Для профилактики гриппа на сегодняшний день существует широкий выбор лекарственных средств. Однако следует отметить, что эффективность профилактики подобными средствами не обладает достаточной эффективностью.

Источник: http://med.bobrodobro.ru/10814

Экспресс-диагностика гриппа (ИФ)

Иммунофлюоресцентный метод (ИФ). Является в настоящее время основным приемом экспресс-диагностики гриппа, позволяющим обнаружить и идентифицировать возбудителя непосредственно в зараженных клетках, полученных из дыхательных путей больного человека. Сущность иммунофлюоресцентного метода состоит в формировании специфических комплексов между флюоресцирующими антителами и гомологичным антигеном, распознаваемым в люминесцентном микроскопе, где источником света являются УФ-лучи. Для этого используют антитела, конъюгированные флюоресцеина изотиоцианатом (ФИТЦ). Указанная флюоресцентная метка наносится на фиксированные мазки клеток, взятых из носовой полости больного.

Антитела проникают внутрь фиксированных ацетоном клеток и при наличии в них возбудителей ОРЗ, гомологичных антителам, образуют нерастворимый комплекс антиген — антитело, флюоресцирующий в ультрафиолетовых лучах микроскопа и не удаляемый после промывания препарата.

При отсутствии в клетках возбудителей ОРЗ или же при использовании флюоресцирующих антител (ФА), иммунологически не соответствующих имеющемуся возбудителю, комплекс антиген — антитело не образуется и ФА легко удаляются из клеток при промывании препаратов. Результаты реакции учитывают при люминесцентной микроскопии мазков-отпечатков цилиндрического эпителия, содержащего светящиеся скопления вируса, окрашенные специфическими флюоресцирующими антителами.

Для иммунофлюоресцентного изучения могут быть использованы и другие объекты, например однослойные клеточные культуры, зараженные материалами от больных или выделенными от больных вирусами. К числу недостатков иммунофлюоресцентного метода для диагностики гриппа относятся его меньшая чувствительность и специфичность по сравнению с серологическими методами, трудоемкость выполнения, а также необходимость использования дорогостоящего оборудования. В последние годы предприняты попытки усовершенствовать метод иммунофлюоресцентной диагностики гриппа и расширить арсенал существующих экспресс-методов. Л. Е. Камфорин и соавт. (1979, 1981) разработали и апробировали конъюгат к РНП вируса гриппа А, отличающийся выраженной активностью в отношении вариантов различных подтипов этого возбудителя. При появлении в циркуляции антигенно отличных вирусов гриппа А любого подтипа использование флюоресцирующих антител к РНП антигену будет весьма целесообразным.

«Грипп и его профилактика», А.А. Смородинцев

При перепечатке материалов сайта гипер-ссылка на сайт обязательна.

Источник: http://www.vitaminov.net/rus-gripp-diagn.html

Экспресс диагностика гриппа

бактериальных инфекций

  • Мнение врачей о лечении

    вирусных инфекций

  • Мнение врачей о лечении

    Экспресс-диагностика гриппа

    Лечение гриппа, как и лечение любой другой болезни тем успешнее, чем скорее оно начато. Но как отличить грипп от множества других респираторных заболеваний? Только при помощи своевременной диагностики болезни!

    Научный прогресс не сбавляет оборотов, сегодня при наличии респираторной инфекции врач может назначить лечение, не опираясь на практически одинаковые для разных видов вируса симптомы и надеясь, что хоть какой-то компонент этого лечения достигнет цели, а может быстро и четко определить не только вирус-возбудитель, но даже его разновидность – так называемый штамм.

    В ходе диагностики гриппа вирус выделяется из биологических сред заболевшего человека – его слюны и мокроты, смывов и мазков со слизистых выстилок верхних дыхательных путей, реже – крови. При этом методики исследований позволяют не просто определить наличие вируса в организме – они позволяют врачу «прочесть» генетический материал выделенного вируса, и понять, какой именно это вирус.

    Частые респираторные инфекции, ОРВИ, грипп буквально «отжимают» из организма все силы. Для устранения имеющейся иммунной недостаточности и поддержания иммунитета в условиях повышенной нагрузки на организм в медицинской практике широко применятся иммунокоррекция… Читать далее…

    Современные диагностические тесты чрезвычайно чувствительны и специфичны, при этом очень важно то, что появились экспресс-методы диагностики. Они определяют возбудителей болезни очень быстро – всего через два-три часа после анализа материала, благодаря чему уже сразу можно будет назначить больному специфическое, эффективное лечение конкретной разновидности вируса гриппа. Следует помнить, что максимально точный результат диагностики можно получить в том случае, если анализы были взяты у больного в начале болезни – до четвертого дня.

    Один из высокоинформативных экспресс-методов диагностики гриппа — полимеразная цепная реакция (ПЦР). В ходе этой реакции из исследуемого материала выделяется генетический материал вируса гриппа и сравнивается с РНК известных штаммов. Метод позволяет получить информативное заключение в течение нескольких часов, но он дорогостоящий, и потому применяется в ходе экспресс-диагностики гриппа редко.

    Другой наиболее распространенный метод экспресс-диагностики гриппа – МФА или прямая реакция иммунофлюоресценции. В ходе исследования на подготовленный исследуемый материал наносится несколько люминисцентных сывороток в различным типам вируса гриппа, а затем препарат изучается под люминисцентным микроскопом. По месту свечения и его характеру врач делает заключение о том, какой штамм вируса гриппа у пациента, и заключение это можно получить всего через два часов после сбора материала на исследование.

    Впрочем, есть и еще более «скоростные» экспресс-методики – например, иммунохроматография (ИХА), которая дает результат за 10 минут.

    Свести к минимуму затраты времени и получить результат даже без специального оборудования для экспресс-диагностики помогут специальные тест-наборы, работающие по принципу, близкому к работе всем известных тест-полосок для определения беременности в домашних условиях. Тесты такого типа для диагностики ОРВИ информативны только в два первых дня с начала заболевания и позволяют провести предварительную диагностику вируса гриппа без определения его штамма даже в домашних условиях. Благодаря быстрой диагностике болезни можно начать ее лечить как можно раньше – до того как появятся осложнения.

    Читайте также:

    Добавить комментарий Отменить ответ

    Про-инфекции.рф Все права защищены ©

    Источник: http://xn—-jtbibaktfik2c0a.xn--p1ai/virus/%D1%8D%D0%BA%D1%81%D0%BF%D1%80%D0%B5%D1%81%D1%81-%D0%B4%D0%B8%D0%B0%D0%B3%D0%BD%D0%BE%D1%81%D1%82%D0%B8%D0%BA%D0%B0-%D0%B3%D1%80%D0%B8%D0%BF%D0%BF%D0%B0/

    / Микра / Занятия / 28. ОРВИ

    ЗАНЯТИЕ № 28 ТЕМА: ОСТРЫЕ РЕСПИРАТОРНЫЕ ВИРУСНЫЕ ИНФЕКЦИИ (ОРВИ). ВИРУСОЛОГИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА ЗАБОЛЕВАНИЙ.

    ПЕРЕЧЕНЬ КОНТРОЛЬНЫХ ВОПРОСОВ

    1. Острые респираторные заболевания. Этиология. Таксономия основных возбудителей ОРВИ.

    2. Ортомиксовирусы. Классификация и общая характеристика семейства. Вирусы гриппа. Ультраструктура. Биологические особенности. Репродукция. Антигенная структура. Типы и подтипы вируса гриппа. Изменчивость — антигенный дрейф, антигенный шифт, следствия.

    3. Методы лабораторной диагностики гриппа: экспресс-диагностика, вирусологический метод, серодиагностика.

    4. Иммунитет. Специфическая профилактика и лечение гриппа.

    5. Парамиксовирусы. Общая характеристика и классификация семейства. Ультраструктура, биологические особенности парамиксовирусов.

    6. Эпидемиология и клиника основных заболеваний, вызываемых парамиксовирусами.

    7. Методы лабораторной диагностики парагриппозных инфекций. Иммунитет. Специфическая профилактика и лечение.

    8. Коронавирусы: классификация, свойства, роль в патологии человека, вирусологическая диагностика коронавирусной инфекции.

    9. Реовирусы: классификация и характеристика семейства. Роль вирусов рода Reovirus в патологии человека, вирусологическая диагностика.

    10. Вирус краснухи. Таксономия. Биологические свойства. Патогенез и клиника заболевания. Тератогенное действие вируса. Врожденная краснуха. Вирусологическая диагностика краснухи. Профилактика.

    11. Герпесвирусы: состав и характеристика семейства. Резистентность к физическим и химическим факторам. Вирусы простого герпеса 1 и 2 серотипов. Свойства. Патогенез герпетических инфекций. Варицеллавирус: сходства и отличие от ВПГ, взаимодействие с организмом человека. Ветряная оспа, опоясывающий герпес. Вирусологическая диагностика инфекций.

    12. Цитомегаловирус (бета-герпесвирусы). Свойства. Формы инфекции. Вирус Эпштейна-Барр (гамма-герпесвирусы). Лабораторная диагностика инфекционного мононуклеоза. Герпесвирус человека 6, роль в патологии человека ГВЧ-6, -7, -8 (синдром хронической усталости, саркома Капоши).

    ЛАБОРАТОРНАЯ И САМОСТОЯТЕЛЬНАЯ РАБОТА

    Этиология острых респираторных вирусных инфекций (заполнить таблицу)

    Суперкап, спиральный сегм. РНК

    грипп А, грипп В, грипп С

    вакцина содержит антигены штаммов вирусов А (H3N2), А (H1 N1) и вируса типа В;шифт полн. замещ., дрейф незначит.

    Paramyxoviridae Суперкап., спираль. лин. РНК-,

    парагрипп (вирусы парагриппа 1-го и 3-го типов)

    эпидемический паротит, парагрипп (вирусы парагриппа 2-го и 4-го типов)

    риниты и другие формы ОРЗ

    Простой, кубический РНК+

    Суперкапс, спирал. РНК+

    ОРЗ с поликлиническим течением, тяжелая (атипичная пневмония)

    Суперкапсид, куб. РНК+

    Краснуха, Лихорадка, припухание заднешейных, затылочных, околоушных и других лимфоузлов; сыпь

    Характеристика ортомиксо- и парамиксовирусов (заполнить таблицу)

    Таксономия и классификация

    РНК, нуклеокапсид спиральный, диаметрнм, нуклеиновая кислота из восьми фрагментов, минусовая нить РНК

    РНК, нуклеокапсид спиральный, диаметрнм, линейная, минусовая нить РНК

    Сферическаянм

    Тип НК (особенности)

    нуклеиновая кислота из восьми фрагментов минусовая

    нуклеиновая кислота линейная нефрагментированая

    Тип симметрии нуклеокапсида

    H N — вирусов гриппа

    HN — вирусов парагриппа и паротита; Н – вируса кори; G- РСВ

    Куриный эмбрион, клетки, белые мыши

    Куриный эмбрион, клетки,

    ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА ГРИППА

    (Леч. арбидол –индуктор интерферона, ремантадин замедляет. репродукцию, терафлю-ингибитор нерамидазы)

    Экспресс-диагностика РИФ прямой или непрямой метод – обнаружение антигена вируса в исследуемом материале. Диагностически признаком является обнаружение не менее 3 клеток цилиндрического эпителия с отчетливо видимым зеленоватым специфическим свечением, яркость которого оценивается на один крест и более.

    Исследуемый материал мазок- отпечаток из носоглотки получают введением тампона по наружной стенке носа поочередно в обе полости носа на глубину 2-3 см. Затем тампон слегка опускают книзу, вводят внижний носовой ход, прижимают наружную стенку носа и вращательными движениями тщательно снимают десквамированный эпителий. Тампоны погружают в пробирку с 2 мл ФБР. Взятые материалы быстро (в течение 1-4 ч) доставляют в лабораторию.

    Диагностический препарат флюоресцирующие сыворотки, содержащие антитела к вирусам гриппа А

    (H1N1), А (H3N2), В, парагриппа 1, 2 и 3 типов, РС-вирусу и аденовирусам

    2. Вирусологический метод (целесообразно проводить в первые 3 дня заболевания)

    Исследуемый материал: отделяемое носа, зева, конъюнктивы, а также секционный материал (ткани легкого, кусочки бронхов и др.).

    1 этап. Подготовка исследуемого материала Материал отбирают с помощью стерильного тампона, который погружают затем в пробирки с 5,0 мл среды Игла или среды 199 с антибиотиками и немедленно направляют в лабораторию, где тампоны с вирусным материалом отжимают в среду, материал центрифугируют в течение 20 мин при об/мин и температуре 4°С или используют в неосветленном виде.

    2 этап. Заражение Для выделения вирусов гриппа исследуемые материалы после их первичной обработки вводят по 0,1 мл в амниотическую полость и по 0,2 мл в аллантоисную полость 10-дневных куриных эмбрионов. Эмбрионы инкубируютсячаса при t 33-35°C.

    3 этап. Вскрытие эмбрионов, отсасывание амниотической или аллантоисной жидкости в пробирку. Выявление вируса в РГА.

    РГА с целью выявления вируса гриппа

    Исследуемый материал: вирусосодержащий материал ( амниотичекая или аллантоисная жидкость) Диагностический препарат: 1% суспензия отмытых эритроцитов кур

    Принцип метода: способность вируса гриппа (тропизм) агглютинировать эритоциты кур

    Вывод: положительная РГА указывает на присутствие (индикацию) вируса гриппа в исследуемом материале

    4 этап. Титрование вируса в РГА (для определения рабочей дозы перед постановкой РТГА с целью идентификации вируса).

    1 кап. взвеси КЭ

    5 этап. Идентификация (серотипирование) вируса в РСК и/или в РТГА.

    С помощью РСК можно идентифицировать NP-Aг и определить тип вируса, с помощью РТГА можно идентифицировать H-Аг и N-Аг, определить подтип вируса.

    Идентификация вируса в РТГА

    Исследуемый материал: вирусосодержащий материал ( амниотичекая или аллантоисная жидкость) Диагностический препарат: типоспецифические иммунные сыворотоки (см.таблицу)

    Дополнительные ингредиенты реакции: физиологический раствор, 1% суспензия эритроцитов кур

    Принцип метода: РТГА основан на способности специфических антител, содержащихся в сыворотке крови, тормозить гемагглютинирующую активность вируса гриппа соответствующего антигенного подтипа, что визуально определяется по оседанию или склеиванию эритроцитов.

    Для проведения РТГА к 0,2 мл последовательных разведений типоспецифических иммунных сывороток добавляют по 0,2 мл рабочей дозы вируса в количестве 4 гемагглютинирующих единиц (ГЕ). Одной ГЕ считают последнее разведение вируса, дающее отчетливую гемагглютинацию. После 1-часового контакта сыворотки с вирусом при комнатной температуре в каждую лунку добавляют по 0,4 мл 1% взвести куриных эритроцитов. Титром сывороток считают ее последнее разведение, блокирующее 4 ГЕ вируса.

    3. Серодиагностика гриппа с помощью РТГА

    Исследуемый материал: сыворотка крови больного Диагностический препарат: диагностикумы сухие содержащие антигены вирусов (см. таблицу)

    Дополнительные ингредиенты реакции: физиологический раствор, 1% суспензия эритроцитов кур

    Вывод: увеличение титра антител в 4 раза к свидетельствует о том , что обследуемый пациент переболел гриппом серотипа В

    ДНК ГЕРПЕСВИРУСЫ (воздушно – капельный путь)

    Таксономия и классификация: (смотри таблицу ниже)

    Форма, размер вириона Крупные сложные вирусы сферической формы диаметромнм, нуклеокапсид кубический Наличие суперкапсидаимеется Тип НКдвухнитевая линейная ДНК

    Лабораторная диагностика герпесвирусных инфекций

    Диагностика инфекций, вызываемых вирусом простого герпеса, вирусом цитомегалии

    Исследуемый материал:содержимое пузырьков и герпетических везикул, соскобы роговой оболочки глаз, кровь, ликвор, носоглоточный смыв, моча , сперма, при летальном исходе — мозговая ткань.

    Цитоскопия (окраска, характер изменений клеток при заражении ВПГ) Вирусы вызывают слияния пораженных клеток с образованием гигантских много ядерных клеток (синцитиев) с внутриядерными ацидофильными включениями Каудри (окраска по Романовскому-Гимзе)-

    При заражении ВЦМ в моче и слюне обнаружение крупных «цитомегаловирусных» клеток

    Размножение вируса проводят в куриных эмбрионах (на хорион-аллантоисную оболочку, появляются «оспины»), культурах клеток (ЦПД – многоядерные клетки с внутриядерными включениями и круглоклеточная дегенерация), мышатах-сосунках в мозг (гибель животных) или кроликах в роговицу (кератит). Идентификацию проводят в РН или РИФ.

    Обнаруживают вирус по ЦПД – многоядерные клетки с внутриядерными включениями и круглоклеточная дегенерация —«глаза совы».)

    Серодиагностика (реакции, особенность постановки) ИФА или РСК в парных сыворотках. Серодиагностика ввиду значительной инфицированности популяции не представляет существенной диагностической ценности.

    Для продолжения скачивания необходимо собрать картинку:

    Источник: http://studfiles.net/preview//

    Лабораторная диагностика гриппа и ОРВИ

    Известно более 200 разновидностей вирусов, избирательно поражающих респираторный тракт человека (возбудителей ОРВИ).

    У большинства возбудителей ОРВИ первичное размножение вирусов происходит в слизистой оболочке дыхательной системы, поэтому клиническая картина сходная, заболевание протекает в виде ринита, ринофарингита, как правило, в легкой форме. У детей раннего возраста вирусы могут поражать нижние отделы респираторного тракта, и болезнь протекает в более тяжелой форме в виде бронхитов, бронхиолитов, пневмоний. Наиболее тяжело протекающей острой вирусной респираторной инфекцией является грипп, который часто принимает эпидемическое распространение, характеризуется явлениями общей интоксикации, лихорадкой, поражением дыхательного тракта, нервной и сердечно-сосудистой систем. Максимальное число тяжелых форм течения инфекции наблюдается в период пандемий, обусловленных новым вариантом вируса гриппа.

    Лабораторная диагностика – ранняя и ретроспективная – проводится для подтверждения клинического диагноза, дифференциации гриппа от ОРВИ другой этиологии и для эпидемиологических целей. Вирусологическая лаборатория ФГУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии в Курской области», входящая в состав опорной базы Федерального центра по гриппу и острым респираторным вирусным инфекциям, проводит исследования с целью этиологической расшифровки заболеваемости гриппом и ОРВИ, в том числе в организованных коллективах детей и взрослых, проведение лабораторных исследований в целях расшифровки региональной структуры заболеваемости гриппом и ОРВИ. Лаборатория оснащена современным оборудованием, имеет необходимые диагностические препараты, укомплектована высококвалифицированными специалистами.

    Лаборатория оуществляет диагностику с помощью экспресс-методов, вирусологических и серологических методов исследования. Быстрая (экспресс) диагностика гриппа и ОРВИ:

    1)метод флюоресцирующих антител (МФА) — основан на выявлении вирусных антигенов в клетках эпителия носовых ходов, конъюнктивы (при явлениях конъюнктивита). Исследуемый материал: мазки из носа, конъюнктивы, взятые в первые 3 дня и не позднее 5 дня болезни. Определяемые возбудители: — вирусы сезонного гриппа типа А (H1N1) — вирусы сезонного гриппа типа А (H3N2) — вирусы гриппа типа В — вирусы парагриппа 1, 2, 3 типов — аденовирусы — респираторно-синцитиальный вирус;

    2) метод полимеразной цепной реакции (ПЦР)- основан на обнаружении в клинических пробах генетического материала вирусов (РНК или ДНК)- является наиболее современным, высокочувствительным методом.

    Исследуемый материал: мазки из носа и зева, взятые в первые 3 дня и не позднее 5 дня болезни, секционный материал. Определяемые возбудители:

    — вирусы пандемического высокопатогенного гриппа типа А (H1N1)

    — вирусы гриппа типа А

    — вирусы гриппа типа В — вирусы парагриппа 1, 2, 3,4 типов

    — аденовирусы — респираторно-синцитиальный вирус;

    Вирусологическая диагностика — выделение вируса на чувствительной клеточной культуре с последующей идентификацией в реакции нейтрализации или ПЦР.

    Этот метод отличается трудоемкостью и длительностью и используется, главным образом, для эпидемиологических и научных целей (изучается изменчивость вирусов, что помогает прогнозировать эпидемические подъемы гриппа, отбираются актуальные штаммы, пригодные для изготовления вакцин) Исследуемый материал: мазки из носа и зева (в первые 3 дня и не позднее 5 дня болезни).

    — вирусы гриппа типа А (разные серотипы)

    — вирусы гриппа типа В Серологическая диагностика является ретроспективной. Она выявляет прирост титров антител к возбудителям заболевания в парных сыворотках крови, что позволяет установить точную этиологию даже при отрицательных результатах других методов лабораторной диагностики, а также при бессимптомном или атипичном течении гриппа, широко применяется и для эпидемиологических целей. Исследуемый материал: сыворотки крови, взятые в начале заболевания и черездней.

    Возбудители к которым определяется прирост титров антител:

    — вирусы сезонного гриппа типа А (H1N1)

    — вирусы сезонного гриппа типа А (H3N2) — вирусы гриппа типа В

    — вирусы парагриппа 1, 2, 3 типов

    В период подьема заболевамости гриппом и ОРВИ (в октябре- декабре 2009г.) вирусологической лабораторией обследовано методом флюоресцирующих антител (МФА) 432 человека. У 27% заболевших был выявлен аденовирус, у 8,3% — вирус парагриппа 3 типа, у 8% — респираторно-синцитиальный вирус, у 2% — вирусы парагриппа 1, 2 типов, у 0,2% — вирус сезонного гриппа типа А (H1N1).

    При обследовании методом ПЦР 565 больных с подозрением на высокопатогенный грипп типа А (H1N1) РНК вируса обнаружена у 213 человек (в 38% проб). По даннным серологического обследования 67 больных ( в октябре и ноябре) заболевания гриппозной этиологии составили 4,3 % (грипп А(H1N1) сезонный — 2 человека), парагрипп 3 типа — 4,5% ( 3 человека), парагрипп 2 типа — 1,5% ( 1человек).

    (c) Федеральное бюджетное учреждение здравоохранения «Центр гигиены и эпидемиологии в Курской области», г.

    Адрес:, г. Курск, ул. Почтовая, д. 3

    Источник: http://46cge.rospotrebnadzor.ru/info/17112

    ЭКСПРЕСС-ТЕСТ НА ГРИПП

    Опасность заражения вирусом ГРИППА заключается в неспецифичности первичных симптомов. Без особых диагностических средств невозможно наверняка отличить ГРИПП от других ОРЗ/ОРВИ!

    Именно поэтому так важно вовремя выявить ГРИПП, и начать его эффективное лечение. Сегодня сделать это не составляет никакого труда! Современные диагностические средства позволяют за считанные минуты самостоятельно определить вирус ГРИППА при первом же подозрении.

    Теперь нет необходимости идти в поликлинику и стоять долгие очереди, когда можно быстро, надежно и легко проверить себя и своих близких самостоятельно в домашних условиях.

    Экспресс-тест на грипп типа А и В – это доступное универсальное средство диагностики, позволяющее быть уверенным в своем здоровье и здоровье тех, кто Вам по-настоящему дорог!

    Когда симптомы заболевания присутствуют и вы считаете, что подверглись воздействию вируса гриппа, необходимо НЕМЕДЛЕННО проверить правильность своих подозрений, проведя процедуру тестирования при помощи Тест-набора «РЭД грипп А и В».

    Проведя элементарную процедуру, взяв МАЗОК ИЗ НОСА при помощи ватного тампона и потратив всего 10 МИНУТ времени на ожидание результата тестирования, Вы ОБЕЗОПАСИТЕ СЕБЯ И СВОИХ БЛИЗКИХ, своевременно выявив причину заболевания и приняв радикальные меры по эффективному лечению.

    ГРИПП

    Что же такое ГРИПП? – это острое высоко заразное инфекционное заболевание, которое отличается резким токсикозом, интенсивным поражением трахеи и крупных бронхов и умеренными катаральными явлениями. Клинические симптомы гриппа могут значительно изменяться в зависимости от иммунитета организма, возраста заболевшего и от его типа (А, В или С).

    Опасность заражения вирусом ГРИППА приводит к возникновению заболевания, от легкой до тяжелой формы с осложнениями.

    Для эффективного лечения гриппа КРАЙНЕ ВАЖНО быстро и правильно установить факт инфицирования на начальной стадии.

    Заболевание вирусом гриппа часто путают с ОРЗ/ОРВИ из-за схожести симптомов, а диагноз становится очевиден, когда болезнь разворачивается в полную силу.

    Cимптомы ГРИППА

    • Температура (обычно высокая), сопровождающаяся лихорадкой;
    • Головная боль;
    • Усталость/слабость;
    • Кашель;
    • Боль в горле;
    • Насморк или заложенность носа;
    • Ломота в теле;
    • Иногда понос и рвота (чаще встречается у детей).

    КЛИНИКА ЗАБОЛЕВАНИЯ ГРИППОМ

    На начальной стадии заболевания:

    Изменения в ротоглотке: наблюдается выраженное покраснение мягкого неба с четким разграничением от твердого неба.

    На 3-4 день от начала заболевания: покраснение сменяется сосудистой «сеточкой». При тяжелой форме заболевания мягкое небо покрывается мелкими кровоизлияниями, появляется синюшность. Больные отмечают першение и сухость в глотке.

    К 7-8 дню от начала заболевания слизистая мягкого неба у большинства больных приобретает нормальный вид.

    Изменения в носоглотке: наблюдается покраснение, отечность и сухость слизистой оболочки носа, вызывая затрудненное дыхание через нос.

    2-3 день от начала заболевания: появляются выделениями из носа. У 80% заболевших наблюдается ринит, длящийся 4-7 дней. Присутствует вероятность возникновения носовых кровотечений.

    При легкой форме гриппа типичны проявления следующих синдромов:

    • Трахеобронхит (мучительный сухой кашель, саднение в горле или боль в груди, за грудиной). Кашель наблюдается примерно у 90% больных и длится 5-6 дней.
    • Ларингит (осиплость голоса и боль в горле) может сочетаться с трахеитом. Трахеит в клинической картине преобладает. Ларинготрахеиты у детей могут развиться в круп.

    Опасность заболевания ГРИППОМ вызвана возникновением осложнений:

    Во время заболевания гриппом инфекционному воздействию подвергаются практически все системы организма:

    • Легкие. Изменения соответствуют возрасту больного и усугубляются наличием сердечно-сосудистых и легочных заболеваний. При выслушивании легких могут определяться жесткое дыхание и кратковременные сухие хрипы.
    • Сердечно-сосудистая система. Изменения вызваны токсическим поражением мышцы сердца. При выслушивании сердца определяется приглушенность тонов, иногда систолический шум на верхушке сердца и нарушение ритма по типу экстрасистолии. В начале заболевания, при повышении температуры тела отмечается учащение пульса, которое сопровождается побледнением кожных покровов. На 2-3 день, наряду с вялостью и разбитостью в теле, возникает урежение пульса, которое сопровождается покраснением кожи.
    • Органы пищеварения. Изменения не выражены. Нередко отмечаются снижение аппетита, ухудшается перистальтика кишечника и присоединяются запоры. Язык густо обложен белым налетом, не утолщен. Живот безболезненный. То, что известно под названием «желудочный грипп», вызывается совсем не вирусом гриппа. Кратковременное расстройство кишечника связано с обострением хронических желудочно-кишечных заболеваний.
    • Мочевыделительная система. Выделяясь через почки, вирусы приводят к повреждению почечной ткани. Такие нарушения могут сопровождаться появлением белка и элементов крови в анализах мочи. При неосложненном течении гриппа нарушений со стороны почек и мочевого пузыря не наблюдается.
    • Центральная нервная система. Токсическая реакция проявляются резкой головной болью, усиливающейся под воздействием внешних раздражающих факторов. Может сопровождаться чрезмерной возбужденность либо, наоборот, сонливость. В редких случаях могут проявиться рвота, бредовые состояния, судороги, потеря сознания, обмороки.
    • Периферическая кровь – При увеличении количества лейкоцитов и СОЭ гемоглобин и эритроциты не меняются.

    В случае легкой форме гриппа температура тела может оставаться нормальной или повышаться не более 38° по Цельсию, симптомы токсикоза слабо выражены или отсутствуют.

    При среднетяжелой форме гриппа температура тела повышается до 38,5-39,5° и отмечаются классические симптомы заболевания.

    Интоксикация: обильное потоотделение, общая слабость, светобоязнь, головная боль, суставные и мышечные боли.

    При развитии тяжелой формы гриппа температура тела поднимается до 40-40,5°. Появляются признаки энцефалопатии (судороги, галлюцинации), сосудистые расстройства (носовые кровотечения) и рвота.

    Если же грипп протекает без осложнений, лихорадочный период продолжается 2-4 дня и болезнь заканчивается в течение 5-10 дней. Возможны повторные подъемы температуры тела, однако они обычно обусловлены наслоением какой-либо бактериальной флоры или другой вирусной респираторной инфекции. После перенесенного гриппа в течение 2-3 недель могут сохраняться явления постинфекционной астении: утомляемость, общая слабость, головная боль, раздражительность, нарушение сна и т.д.

    При лечении ГРИППА важно помнить, что при нарушениях сердечно-сосудистой деятельности не рекомендуется применять лекарственные средства, в составе которых присутствует фенилэфрин. Данный компонент влияет на артериальное давление, способствуя его повышению, что в свою очередь оказывает дополнительную нагрузку на сердечную мышцу. В большинстве случаев медикаментозное лечение ГРИППА рекомендуется проводить препаратами, содержащими парацетамол, витамин С и противоаллергический компонент, которые быстро устраняют симптомы простуды и ГРИППА, а также предотвращают возможные осложнения при развитии заболевания.

    119071, г. Москва, Ленинский проспект, д. 33, стр. 5

    Сделано в России.

    Регистрационное удостоверение №ФСР 2012/13624 от 29.06.2012 г. по ТУ

    Обязательной сертификации не подлежит.

    Претензии и рекомендации, касающиеся улучшения качества продукции, направляйте по адресу:

    Источник: http://testred.ru/

    Реферат-Лабораторная диагностика гриппа — файл 1.doc

    Доступные файлы (1):

      Смотрите также:
  • Кильбурн Э.Д. Вирусы гриппа и грипп (1978)[ документ ]
  • История гриппа[ реферат ]
  • Презентация — Угроза пандемии гриппа. Перспективы лечения и профилактики[ реферат ]
  • Ревматизм[ лекция ]
  • Долгов В.В., Свирин П.В. Лабораторная диагностика нарушений гемостаза[ документ ]
  • Реферат. Диагностика питания растений[ реферат ]
  • Презентация — Холера[ реферат ]
  • Ультразвуковая диагностика в акушерстве[ реферат ]
  • Лабораторная диагностика болезней почек[ реферат ]
  • Судебно-медицинская диагностика смертельных отравлений[ лабораторная работа ]
  • Диагностика беременных кобыл[ реферат ]
  • Методы диагностики сахарного диабета[ реферат ]
  • Лабораторная диагностика гриппа

    этиологической диагностики случая респираторного заболевания, то есть лабораторного подтверждения клинического диагноза «грипп» (применяются все перечисленные методы, приоритетной является экспресс-диагностика);

    определения этиологии эпидемии или пандемии гриппа (вирусовыделение);

    прогнозирования следующих эпидемий гриппа (вирусовыделение, серологические методы);

    определения иммуноструктуры населения в межэпидемический период и накануне эпидемии (серологические методы);

    определения напряженности послевакцинального иммунитета (серологические методы);

    осуществления экологических исследований, то есть определения распространенности вирусов гриппа среди птиц различных видов, млекопитающих и других естественных резервуаров возбудителя.

    Метод флюоресцирующих антител (МФА, прямой метод Кунса) является довольно надежным методом быстрой диагностики гриппа, позволяющим обнаружить антигены вируса гриппа непосредственно в клиническом материале через 2-3 ч от момента его взятия. МФА исследуют клетки цилиндрического эпителия слизистой оболочки в участке нижней носовой раковины и задней стенки глотки, которые отбирают сухими ватными тампонами и помещают в среду для транспортировки вирусов. В лаборатории тампоны встряхивают, отжимают и удаляют, а взвесь центрифугируют на протяжении 20 мин со скоростью 3 тыс. об./мин. Из осадка клеток готовят мазки на обезжиренном предметном стекле.

    Для выявления антигенов вируса гриппа в пробах секционного материала делают отпечатки кусочков ткани легкого, а также готовят препараты со слизистой оболочки трахеи и бронхов, соскребая клетки эпителия или плотно прижимая участок пораженной слизистой оболочки к стеклу. Из каждого образца исследуемого на грипп материала делают по 3 мазка на стекле.

    На подсушенные и зафиксированные (например, холодным ацетоном) препараты исследуемых клеток наносят специфические гипериммунные люминесцентные сыворотки к вирусам гриппа А(Н1N1), A(H3N2) и В. После 30-минутной инкубации предметные стекла тщательно промывают буфером, подсушивают и осуществляют микроскопическое изучение клеток с помощью люминесцентного микроскопа.

    Локализация и характер свечения антигена вируса зависят от стадии развития возбудителя в клетке, а также от срока возникновения гриппозной инфекции. В первые 3 дня заболевания антиген чаще локализуется в ядрах клеток цилиндрического эпителия при одновременном диффузном или гранулярном свечении цитоплазмы в той же или в разных клетках. Часто определяется равномерное гомогенное свечение всей клетки с плохой дифференциацией ее внутренней структуры.

    При затухании инфекционного процесса свечение преимущественно наблюдается в цитоплазме или в отдельной ее части в виде гранул.

    При сопоставлении количества пораженных клеток, находящихся в поле зрения люминесцентного микроскопа, и срока течения гриппа отмечено их повышение (6-10) в первые 3 дня заболевания.

    Диагностически значимым является специфическое свечение пяти и более клеток цилиндрического эпителия с яркостью не менее чем 2 .

    Иммуноферментный анализ (ИФА) позволяет обнаружить рибонуклеопротеиновый родоспецифический антиген вируса гриппа в носоглоточных секретах больных острой респираторной инфекцией. Разработаны отдельные тест-системы ИФА для диагностики гриппа А и В, то есть клинический материал исследуется с помощью двух тест-систем одновременно. ИФА в данном случае может применяться для этиологической диагностики случая респираторной инфекции или для скрининга клинических материалов перед вирусовыделением. Однако этот метод не позволяет выявить штаммовую специфичность возбудителя гриппа.

    Материалом для исследования служат выделения из носовой полости больных респираторной вирусной инфекцией, получаемые путем аспирации секретов с помощью аспирационных емкостей, соединенных с вакуумным насосом. Отобранные секреты разводят в 5 раз фосфатно-солевым буферным (ФСБ) раствором с 0,05% твина-20. Для ИФА-диагностики гриппа допускается использование и носоглоточных мазков. При этом ватные тампоны со слизью и клетками ресуспендируют в 2 мл ФСБ с 0,05% твина-20, а перед исследованием двукратно замораживают-размораживают для выделения вирусных антигенов из клеток. Подготовленные клинические материалы можно сохранять на протяжении 3-4 мес. при температуре°С.

    ИФА базируется на выявлении антигенов вирусов гриппа А и В с помощью моноклинальных (МК) антител к рибонуклеопротеину (РНП) соответствующих возбудителей в сендвич-варианте: противогриппозные МК антитела адсорбируют в лунках планшета, после чего к ним последовательно добавляют контрольный и исследовательский материалы, а после соответствующей экспозиции — конъюгант специфических МК антител с пероксидазой хрена. Образованный иммунный комплекс: МК — антитела к РНП вирусов гриппа А/В — РПН-антигены вирусов гриппа А/В — меченные пероксидазой МК-антитела к РНП вирусов гриппа А/В выявляют добавлением субстратной смеси, в состав которой входят перекись водорода (субстрат пероксидазы) и ортофенилендиамин (краситель). После определенной экспозиции (до появления желтой окраски в лунках с положительными контрольными образцами) ферментную реакцию останавливают серной кислотой. При проведении каждого этапа ИФА лунки планшета перед добавлением следующего компонента промывают буферным раствором.

    Результаты рассчитывают с помощью автоматизированных спектрофотометров (ридеров) при длине волны 490 нм, определяя показатели оптической плотности смеси в лунках планшета. При этом учитывают коэффициенты, указанные в инструкции к тест-системе, позволяющие рассчитать оптическую плотность, выше которой исследовательские образцы считаются положительными.

    Полимеразная цепная реакция (ПЦР) — метод геномолекулярного исследования клинических и секционных материалов, который может применяться для экспресс-диагностики гриппа. Однако чаще ПЦР-метод используется для широкого спектра экологических исследований на грипп. В основе метода — выявление в исследовательских образцах генетических последовательностей определенных вирусов гриппа и их амплификация к сотням миллионов копий, идентифицируемых методом электрофореза в полиакриламидном геле (ПААГ) или гибридизационно-иммуноферментным анализом. В нашей стране ПЦР пока что не нашла широкого применения в практической инфектологии.

    Иммунохроматографический анализ (ИХА), или быстрые тесты. Материалом для исследования являются носоглоточные смывы, которые наносят на нитроцеллюлозный фильтр с определенными иммунными ингредиентами, заправленный в пластиковую кассету. Результат исследования учитывают через 5-15 мин. При наличии антигенов вируса гриппа проявляются две красные полосы, одна из которых контрольная.

    Исследуемым материалом являются мазки из носа, зева и задней стенки глотки, смывы из носовой части глотки, секционный материал (фрагменты трахеи, бронхов, легких). Иногда для выделения вирусов используют кровь и спинномозговую жидкость.

    Оптимальным сроком отбора клинического материала являются первые 2-3 сут от начала заболевания.

    Для транспортировки отобранного материала в лабораторию используют среду с белковым стабилизатором, способствующим более длительному сохранению инфекционной активности вируса гриппа. Это может быть раствор Хенкса или среда 199, Игла с 0,5% бычьего сывороточного альбумина (БСА) или с 0,5% желатина, или даже с 0,5% снятого (обезжиренного) молока. Можно применять забуференный физиологический раствор — 0,01 М фосфатно-буферный раствор, рН 7,2-7,4 0,15 М натрия хлорида с 0,5% БСА.

    Перед выездом за исследуемым материалом среду разливают в пробирки или флаконы по 0,5 мл, добавляют по 400 ЕД/мл пенициллина, 200 мкг/мл стрептомицина, 100 мкг/мл неомицина, 100 мкг/мл микостатина.

    Секреты слизистых оболочек из носа и горла больных берут сухими стерильными ватными (марлевыми) тампонами, которые затем погружают в пробирку со средой, закрывают пробкой, маркируют и доставляют в лабораторию в термосе со льдом, не допуская замораживания.

    В лаборатории тампоны выжимают в центрифугальную пробирку со средой, центрифугируют 20 мин при 2-3 тыс. об./мин и температуре 4°С. Избыточный осадок используют для выделения вируса гриппа.

    Обязательному вирусологическому исследованию подлежит секционный материал от умерших с диагнозом «пневмония» или «острая респираторная инфекция». Для исследования отбирают кусочки легких без признаков геморрагии и некроза, фрагменты трахеи и соскоб с нее. Материал помещают в стерильную посуду со смесью равных частей глицерина и забуференного физиологического раствора и оставляют при температуре 4°С на сутки. Перед исследованием кусочки тканей дважды отмывают в чашках Петре стерильным физиологическим раствором, измельчают ножницами и растирают в стерильной ступке с песком, постепенно добавляя физиологический раствор до образования 20-30% суспензии. Последнюю центрифугируют при 10 тыс. об./мин в течение 20 мин, избыточный осадок используют для выделения вируса гриппа.

    Методы повышения эффективности изоляции выделения вируса гриппа:

    1. Обработка исследуемого материала равным объемом 0,25% раствора трипсина для усиления инфекционной активности вирусов (протеолитической активации гемагглютинина).

    2. Концентрация с помощью адсорбции на куриных эритроцитах. Для этого к исследуемому материалу, осветленному фильтрованием сквозь четырехслойный марлевый фильтр, добавляют равный объем стерильной 2% суспензии эритроцитов морской свинки. Смесь встряхивают и оставляют при перемешивании в ледяной бане на 20 мин, после чего ее центрифугируют (1000 об./мин). Надосадочную жидкость удаляют, а к эритроцитам в осадке добавляют 0,4-0,6 мл забуференного физиологического раствора и используют для заражения куриных эмбрионов (по 0,1 мл).

    Подготовленные к вирусовыделению образцы должны сохраняться при температуре 4°С не дольше 48 ч. При необходимости более продолжительного хранения их разливают в ампулы, которые погружают в смесь сухого льда со спиртом, или сохраняют в морозильной камере при -70°С, или в жидком азоте.

    В случаях, когда материалом для выделения вируса гриппа является кровь или спинномозговая жидкость, в которых он может находиться в составе иммунного комплекса, исследуемый материал обрабатывают антииммуноглобулиновой сывороткой.

    Этот метод диагностики гриппа является наиболее доступным и чувствительным. Используют 9-11-дневные куриные эмбрионы, которые заражают инфекционным материалом в объеме 0,1 мл в амниотическую и аллантоисную полости, после чего эмбрионы инкубируют при температуре 33-34°С 72 ч.

    При выделении вируса гриппа С материал инокулируют только в амниотическую полость 7 дневных куриных эмбрионов и инкубируют при температуре 33°С 5 сут.

    После соответствующей инкубации эмбрионы охлаждают на протяжениич при 4°С и осуществляют их вскрытие. Далее отбирают эмбриональные жидкости — амниотическую и аллантоисную, в которых проводят индикацию вируса гриппа. Для этого используют реакцию гемагглютинации (РГА) с 1% эритроцитами морской свинки, петуха или человека с группой крови 0. Доказано, что эритроциты млекопитающих более чувствительны, чем куриные, для индикации вируса в эмбриональных жидкостях на ранних пассажах. Когда вирус уже адаптирован к куриным эмбрионам для индикации целесообразно использовать эритроциты петуха, которые больше по размерам и быстрее оседают.

    Если результат РГА отрицательный, проводят два-три дополнительных слепых пассажа, после чего (при сохранении результата РГА) исследование материала прекращают, а образец считают несодержащим вирус гриппа.

    В случае наличия агглютинации эритроцитов собранную эмбриональную жидкость освещают центрифугированием в течение 10 мин при скорости 10 тыс. об./мин и хранят при 4°С. При необходимости дополнительного культивирования выделенного вируса эмбриональную жидкость разводят раствором Хенкса или забуференным физиологическим раствором до концентрации/ГАЕ мл и используют для последующего заражения куриных эмбрионов.

    При положительной РГА проводят титрование изолята в этой же реакции. Для этого изолят последовательно разводят с кратностью 2 в двух параллельных рядах лунок планшета для иммунологических исследований от 1:2 до 1:1280 в объеме 0,2 мл. При каждом разведении в каждую лунку добавляют по 0,2 мл физиологического раствора натрия хлорида и по 0,4 мл 1% взвеси эритроцитов петуха. Черезмин учитывают результат титрования вируса в РГА. Различие титра в двух рядах может не превышать одно-двукратного разведения. Если разница больше, титрование следует повторить. Вычисляя титр (в случае двукратного различия), высчитывают его среднеарифметическое значение.

    Если титр в РГА 1:8 или больше, вирус идентифицируют в реакции торможения гемагглютинации (РТГА). Если он меньше чем 1:8, его стараются повысить.

    Существует несколько методов повышения гемагглютинирующей активности свежевыделенных штаммов вируса гриппа. Чаще всего это — проведение дополнительных пассажей на куриных эмбрионах методом пограничных разведений. Успешно используют и ультразвук, разрушающий ингибиторы, блокирующие гемагглютинины вируса. После 5-7-минутной обработки ультразвуком гемагглютинирующая активность вируса возрастает в 4-16 раз, что ускоряет возможность идентификации выделенных вирусов в РТГА.

    После определения достаточного гемагглютинирующего титра изолированного вируса гриппа, его идентифицируют в РТГА. Для этого готовят рабочее разведение вируса, который содержит 4 ГАЕ в заданном объеме жидкости (если титровали в объеме 0,2 мл, то в 0,2 мл). Контролируют правильность приготовления рабочего разведения и, если необходимо, корригируют его. После такой коррекции необходимо снова проверить правильность рабочей дозы возбудителя. Далее осуществляют постановку РТГА: к последовательным разведениям коммерческих диагностических сывороток против возбудителей гриппа А (Н1N1), A (H2N2), A (H3N2), В и С до определенного в инструкции титра добавляют равный объем рабочего разведения выделенного вируса в каждую лунку каждой сыворотки. После определенной экспозиции (чаще 1 ч при комнатной температуре) в каждую лунку вносят двойной объем эритроцитов петуха и через 30 мин определяют результат.

    В случае использования для идентификации вируса гриппа в РТГА диагностических иммунных сывороток, относительно которых не указано, что они получены к ингибиторрезистентным штаммам вируса гриппа, их освобождают от неспецифичных ингибиторов гемагглютинации вируса или для контроля берут неиммунную сыворотку крови от животного одного и того же вида, при иммунизации которого получена диагностическая сыворотка. Если такая контрольная сыворотка тормозит гемагглютинацию вируса в титре 1:20-1:40, то идентификацию вируса следует проводить только после устранения ингибиторов.

    В тех случаях, когда для идентификации вирусов гриппа используются диагностические сыворотки, полученные к ингибиторрезистентным штаммам, дополнительная обработка их не нужна.

    Таксономическая характеристика выделенного вируса гриппа определяется в РТГА по той диагностической сыворотке, которая тормозит его гемагглютинацию. После идентификации вируса вирусологическое исследование считается законченным.

    Если выделенный вирус значительно отличается в титрах РТГА от эталонного штамма (к которому получена диагностическая сыворотка, и титр которого указан на этикетке) или идентификация его в РТГА оказывается неудачной, тип вируса можно определить в реакции связывания комплемента (РСК).

    В РСК используют гемолитическую сыворотку в трехкратном титре, две дозы предварительно оттитрованного комплемента и аллантоисный антиген в количествеГАЕ (по РГА). Разводить антиген ФБР (рН 7,0-7,2) выше, чем 1:10 не рекомендуется.

    Использование в РСК иммунных сывороток морской свинки и аллантоисного антигена не нуждается в титровании комплемента в их присутствии, поскольку они не обладают антикомплементарными свойствами.

    Использование культур клеток для выделения вируса гриппа определяется возможностями лаборатории. Наиболее чувствительными для выделения вирусов гриппа являются однослойные первично трипсинизированные культуры из почек обезьян, эмбриона человека, однодневных цыплят. Но следует иметь в виду, что в этих культурах клеток размножается также и большинство других респираторных вирусов, что обусловливает необходимость дифференциации всей группы возбудителей острых респираторных вирусных инфекций.

    Для выделения вирусов гриппа могут быть использованы и перепривитые культуры клеток, причем цитопатический эффект наиболее четко выражен на культурах MDCK и LLC-MK-2.

    Цитопатическое действие вируса гриппа характеризуется круглоклеточной дегенерацией монослоя. Цитопатические признаки в зараженной культуре иногда появляются на 3-й день, а иногда и позже, вплоть до 10-го дня с момента заражения. Вирусы гриппа А репродуцируются медленнее, их цитопатическое действие определяется появлением фестончатых или вакуолизирующих клеток, отшелушивающихся в процессе дегенерации. Обнаружить такие клетки тяжело, иногда это возможно лишь на втором пассаже. Индикация вируса в клетках по гемадсорбции является более целесообразной, поскольку последняя проявляется значительно раньше, чем цитопатические изменения.

    В реакции гемадсорбции (РГадс) чаще применяют эритроциты морской свинки. При постановке РГадс в каждую пробирку с культурой клеток (зараженной и контрольной) после удаления культуральной среды добавляют по 0,1 мл раствора Хенкса и 0,2 мл 0,4% суспензии эритроцитов морской свинки. Пробирки оставляют клетками вниз на 10 мин при комнатной температуре и микроскопируют. При наличии гемадсорбции в поле зрения микроскопа оказываются клетки, плотно покрытые прикрепленными эритроцитами, не смывающимися при встряхивании. Результат считают положительным при отсутствии гемадсорбции в контрольных пробирках с незараженными клетками. При отрицательной

    Выделение вируса гриппа из клинического материала подтверждает диагноз гриппа. Но отрицательный результат вирусовыделения не свидетельствует об отсутствии вируса гриппа у пациента с респираторной инфекцией гемадсорбции пробирки встряхивают и вторично регистрируют результат через 10 мин. Если при повторной проверке реакция отрицательная, эти пробы подлежат следующему пассажу.

    Индикацию присутствия вируса в зараженной культуре клеток осуществляют и в РГА культуральной жидкости. Если титр гемагглютининов в последней составляет 1:8 и выше, выделенные вирусы гриппа идентифицируют в РТГА. Если титр 1:4 и меньше, материал дополнительно культивируют для повышения титра или проводят первичную идентификацию в РГ^ на инфицированной культуре. Для специфического торможения гемадсорбции выделенного вируса титр диагностической иммунной сыворотки может составлять не менее 1:160 и, безусловно, антигемагглютинины сыворотки должны отвечать антигенной структуре выделенного вируса. Недостатком реакции является то, что в указанных условиях она проводится с неизвестной дозой вируса, что снижает ее чувствительность.

    РГадс может быть использована для исследований во время вспышек гриппа с уже определенной этиологией, когда нужно лишь подтвердить известный тип вируса, или в тех случаях, когда нельзя получить достаточный титр гемагглютининов.

    Перед постановкой РГадс иммунные сыворотки предварительно обрабатывают адсорбцией на эритроцитах морской свинки. Исследуемые и контрольные культуры клеток дважды промывают раствором Хенкса, потом в каждую пробирку вливают по 0,2 мл сыворотки, разбавленной 1:10, и добавляют 0,6 мл указанного раствора. Культуру выдерживают 30 мин при комнатной температуре и подвергают испытанию на наличие гемадсорбционных свойств с эритроцитами морской свинки (0,4% суспензия). Штамм вируса идентифицируют по сыворотке, вызвавшей торможение гемадсорбции.

    Выделение вируса гриппа из клинического материала подтверждает диагноз гриппа. Но отрицательный результат вирусовыделения не свидетельствует об отсутствии вируса гриппа у пациента с респираторной инфекцией.

    В вирусологической лаборатории можно осуществлять и другие вирусологические исследования, например, определение резистентности вируса гриппа к одному из специфических противогриппозных препаратов, инфекционной активности живых противогриппозных вакцин и т. п.

    Серологическая диагностика гриппа базируется на выявлении возрастания титра противогриппозных антител в динамике заболевания или на определении специфических иммуноглобулинов класса М.

    Для данного вида диагностики гриппа чаще применяют РТГА. Последнюю выполняют микрометодом с использованием микропланшетов для иммунологических исследований (общий объем реакции -100 мкл).

    В процессе серологического исследования сывороток крови в РТГА используют их последовательные (начиная с 1:10) двукратные разведения на изотоническом растворе натрия хлорида, диагностикумы вирусов гриппа А(Н1N1), A(H3N2) и В в рабочем разведении 4 ГАЕ в 25 мкл, а также взвесь эритроцитов петуха или человека с группой крови 0 в концентрации 0,4-0,5% (соотношение объемов перечисленных компонентов РТГА 1:1:2).

    Перед исследованием сыворотки крови обрабатывают с целью освобождения их от неспецифических ингибиторов гемагглютинации вирусов гриппа. Для этого чаще используют универсальный препарат — рецепторразрушающий энзим (РРЭ), подходящий для устранения неспецифической ингибиции гемагглютинации вирусов гриппа всех типов. РРЗ представляет собой фермент нейраминидазу, получаемую из нехолерных вибрионов.

    Термолабильные мукополисахаридные ингибиторы разрушают прогреванием сывороток при температуре 56°С на протяжении 30 мин. Для освобождения от термостабильных ингибиторов можно использовать риванол (этакридина лактат), двуокись углерода и т. п. Однако эти методы по эффетивности значительно уступают методу обработки РРЭ, поскольку могут частично разрушать и антитела.

    Для серодиагностики гриппа можно исследовать и одну только сыворотку крови больного на наличие противогриппозных иммуноглобулинов класса М, которые свидетельствуют об острой инфекции. При отдельном определении антител класса М сыворотку крови больного предварительно разделяют на 2 порции, одну из которых сохраняют до постановки определенной серологической реакции, а другую обрабатывают для разрушения макроглобулинов класса М физическими или химическими методами. Один из них — прогревание порции сыворотки при 60 °С на протяжении 30 мин, второй — обработка порции сыворотки 2-меркаптоэтанолом. После этого обе порции исследуют, например, в РТГА. Снижение титров противогриппозного антигемагглютинина в 4 и более раз в порции сыворотки, в которой предварительно разрушали иммуноглобулин, свидетельствует об их наличии в исследуемой сыворотке, что лабораторно подтверждает диагноз гриппа.

    Существует методика выборочного удаления из одной порции исследуемой сыворотки противогриппозных lg с помощью белка А золотистого стафилококка (штамма Cowan). При последующем серологическом исследовании обеих порций сыворотки выявление сниженного или неизмененного титра специфических антител в обработанной порции свидетельствует о наличии в ней иммуноглобулина, Отсутствие антител в обработанной порции сыворотки (при их наличии в необработанной) позволяет сделать вывод, что выявленные антитела принадлежат к классу иммуноглобулинов, а респираторное заболевание вызвано не вирусом гриппа.

    Источник: http://www.studmed.ru/docs/document11710/content